લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા જથ્થાત્મક વિશ્લેષણના સિદ્ધાંતો અને પદ્ધતિઓ

પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીની વિભાજન પદ્ધતિ બે તબક્કાઓ માટે મિશ્રણમાં ઘટકોના જોડાણમાં તફાવત પર આધારિત છે.

વિવિધ સ્થિર તબક્કાઓ અનુસાર, પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીને પ્રવાહી-ઘન ક્રોમેટોગ્રાફી, પ્રવાહી-પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફી અને બોન્ડેડ તબક્કા ક્રોમેટોગ્રાફીમાં વિભાજિત કરવામાં આવે છે.ફિલર તરીકે સિલિકા જેલ સાથે લિક્વિડ-સોલિડ ક્રોમેટોગ્રાફી અને મેટ્રિક્સ તરીકે માઇક્રોસિલિકા સાથે બોન્ડેડ ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફીનો સૌથી વધુ ઉપયોગ થાય છે.

સ્થિર તબક્કાના સ્વરૂપ અનુસાર, લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીને કૉલમ ક્રોમેટોગ્રાફી, પેપર ક્રોમેટોગ્રાફી અને થિન લેયર ક્રોમેટોગ્રાફીમાં વિભાજિત કરી શકાય છે.શોષણ ક્ષમતા અનુસાર, તેને શોષણ ક્રોમેટોગ્રાફી, પાર્ટીશન ક્રોમેટોગ્રાફી, આયન એક્સચેન્જ ક્રોમેટોગ્રાફી અને જેલ પરમિએશન ક્રોમેટોગ્રાફીમાં વિભાજિત કરી શકાય છે.

તાજેતરના વર્ષોમાં, લિક્વિડ કૉલમ ક્રોમેટોગ્રાફી સિસ્ટમમાં હાઇ-પ્રેશર લિક્વિડ ફ્લો સિસ્ટમ ઉમેરવામાં આવી છે જેથી મોબાઇલ તબક્કાને અલગ કરવાની અસરમાં સુધારો કરવા માટે ઉચ્ચ દબાણ હેઠળ ઝડપથી પ્રવાહ થાય, તેથી ઉચ્ચ-કાર્યક્ષમતા (ઉચ્ચ-દબાણ તરીકે પણ ઓળખાય છે) પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફી ઉભરી આવ્યો છે.

ભાગ
01 લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીના જથ્થાત્મક વિશ્લેષણનો સિદ્ધાંત

ગુણાત્મક આધારે જથ્થાબંધ કરવા માટે, ધોરણો તરીકે શુદ્ધ પદાર્થો જરૂરી છે;

લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી ક્વોન્ટિફિકેશન એ પ્રમાણમાં જથ્થાત્મક પદ્ધતિ છે: એટલે કે, મિશ્રણમાં વિશ્લેષકની માત્રાનો અંદાજ શુદ્ધ પ્રમાણભૂત નમૂનાની જાણીતી રકમ પરથી કરવામાં આવે છે.

ભાગ
02 લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા પ્રમાણીકરણ માટેનો આધાર

માપેલ ઘટક (W) ની માત્રા પ્રતિભાવ મૂલ્ય (A) (શિખર ઊંચાઈ અથવા પીક વિસ્તાર), W=f×A માટે પ્રમાણસર છે.

જથ્થાત્મક સુધારણા પરિબળ (f): તે માત્રાત્મક ગણતરીના સૂત્રનો પ્રમાણસરતા અચળ છે, અને તેનો ભૌતિક અર્થ એકમ પ્રતિભાવ મૂલ્ય (પીક વિસ્તાર) દ્વારા દર્શાવવામાં આવેલા માપેલા ઘટકની માત્રા છે.

પ્રમાણભૂત નમૂનાની જાણીતી રકમ અને તેના પ્રતિભાવ મૂલ્યમાંથી જથ્થાત્મક સુધારણા પરિબળ મેળવી શકાય છે.

અજાણ્યા ઘટકના પ્રતિભાવ મૂલ્યને માપો, અને ઘટકની માત્રા માત્રાત્મક સુધારણા પરિબળ દ્વારા મેળવી શકાય છે.

ભાગ
03 માત્રાત્મક વિશ્લેષણમાં સામાન્ય શબ્દો

નમૂના (નમૂનો): ક્રોમેટોગ્રાફિક વિશ્લેષણ માટે વિશ્લેષક ધરાવતો ઉકેલ.પ્રમાણભૂત અને અજાણ્યા નમૂનાઓમાં વિભાજિત.

ધોરણ: જાણીતી સાંદ્રતા સાથેનું શુદ્ધ ઉત્પાદન.અજ્ઞાત નમૂના (અજાણ્યા): મિશ્રણ જેની સાંદ્રતા ચકાસવાની છે.

નમૂનાનું વજન: પરીક્ષણ કરવાના નમૂનાનું મૂળ વજન.

મંદન: અજાણ્યા નમૂનાનું મંદન પરિબળ.

ઘટક : જથ્થાત્મક રીતે પૃથ્થકરણ કરવાની ક્રોમેટોગ્રાફિક ટોચ, એટલે કે, વિશ્લેષક જેની સામગ્રી અજાણ છે.

ઘટકની રકમ (રકમ): ચકાસવામાં આવનાર પદાર્થની સામગ્રી (અથવા સાંદ્રતા).

અખંડિતતા : કમ્પ્યુટર દ્વારા ક્રોમેટોગ્રાફિક પીકના પીક એરિયાને માપવાની કોમ્પ્યુટેશનલ પ્રક્રિયા.

માપાંકન વળાંક: પ્રતિભાવ મૂલ્ય વિરુદ્ધ ઘટક સામગ્રીનો રેખીય વળાંક, પ્રમાણભૂત પદાર્થની જાણીતી માત્રામાંથી સ્થાપિત, વિશ્લેષકની અજાણી સામગ્રી નક્કી કરવા માટે વપરાય છે.

ભાગ
04 લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીનું જથ્થાત્મક વિશ્લેષણ

1. માત્રાત્મક વિશ્લેષણ માટે યોગ્ય ક્રોમેટોગ્રાફિક પદ્ધતિ પસંદ કરો:

l શોધાયેલ ઘટકની ટોચની પુષ્ટિ કરો અને 1.5 થી વધુ રિઝોલ્યુશન (R) પ્રાપ્ત કરો

l પરીક્ષણ કરેલ ઘટકોના ક્રોમેટોગ્રાફિક શિખરોની સુસંગતતા (શુદ્ધતા) નક્કી કરો

l પદ્ધતિની શોધ મર્યાદા અને પ્રમાણીકરણ મર્યાદા નક્કી કરો;સંવેદનશીલતા અને રેખીય શ્રેણી

2. વિવિધ સાંદ્રતાના પ્રમાણભૂત નમૂનાઓ સાથે કેલિબ્રેશન વળાંક સ્થાપિત કરો

3. માત્રાત્મક પદ્ધતિઓની ચોકસાઈ અને ચોકસાઈ તપાસો

4. નમૂના સંગ્રહ, ડેટા પ્રોસેસિંગ અને પરિણામોની જાણ કરવા માટે અનુરૂપ ક્રોમેટોગ્રાફી મેનેજમેન્ટ સોફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરો

ભાગ
05 માત્રાત્મક શિખરોની ઓળખ (ગુણાત્મક)

ગુણાત્મક રીતે દરેક ક્રોમેટોગ્રાફિક શિખરને માપવા માટે ઓળખો

પ્રથમ, ક્રોમેટોગ્રાફિક પીકની જાળવણીનો સમય (Rt) નક્કી કરવા માટે પ્રમાણભૂત નમૂનાનો ઉપયોગ કરો.રીટેન્શન સમયની સરખામણી કરીને, અજ્ઞાત નમૂનામાં દરેક ક્રોમેટોગ્રાફિક શિખરને અનુરૂપ ઘટક શોધો.ક્રોમેટોગ્રાફિક ગુણાત્મક પદ્ધતિ એ પ્રમાણભૂત નમૂના સાથે રીટેન્શન સમયની તુલના કરવાનો છે.માપદંડ અપૂરતોવધુ પુષ્ટિ (ગુણાત્મક)

1. પ્રમાણભૂત ઉમેરણ પદ્ધતિ

2. એક જ સમયે અન્ય પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરો: અન્ય ક્રોમેટોગ્રાફિક પદ્ધતિઓ (મિકેનિઝમ બદલો, જેમ કે: વિવિધ ક્રોમેટોગ્રાફિક કૉલમનો ઉપયોગ કરીને), અન્ય ડિટેક્ટર (PDA: સ્પેક્ટ્રમ સરખામણી, સ્પેક્ટ્રમ લાઇબ્રેરી શોધ; MS: માસ સ્પેક્ટ્રમ વિશ્લેષણ, સ્પેક્ટ્રમ લાઇબ્રેરી શોધ)

3. અન્ય સાધનો અને પદ્ધતિઓ

ભાગ
06 માત્રાત્મક પીક સુસંગતતાની પુષ્ટિ

ક્રોમેટોગ્રાફિક પીક સુસંગતતાની પુષ્ટિ કરો (શુદ્ધતા)

ખાતરી કરો કે દરેક ક્રોમેટોગ્રાફિક શિખર હેઠળ માત્ર એક માપેલ ઘટક છે

સહ-ઇલ્યુટિંગ પદાર્થો (અશુદ્ધિઓ) માંથી હસ્તક્ષેપ માટે તપાસો

ક્રોમેટોગ્રાફિક પીક સુસંગતતા (શુદ્ધતા) ની પુષ્ટિ માટેની પદ્ધતિઓ

ફોટોડિયોડ મેટ્રિક્સ (PDA) ડિટેક્ટર્સ સાથે સ્પેક્ટ્રોગ્રામની સરખામણી

પીક શુદ્ધતા ઓળખ

2996 શુદ્ધતા કોણ સિદ્ધાંત

ભાગ 07 માં સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતી જથ્થાત્મક પદ્ધતિઓ

માનક વળાંક પદ્ધતિ, બાહ્ય પ્રમાણભૂત પદ્ધતિ અને આંતરિક પ્રમાણભૂત પદ્ધતિમાં વિભાજિત:

1. બાહ્ય પ્રમાણભૂત પદ્ધતિ: લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીમાં સૌથી વધુ વપરાય છે

પ્રમાણભૂત નમૂના તરીકે પરીક્ષણ કરવા માટે સંયોજનોના શુદ્ધ નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરીને જાણીતા સાંદ્રતાના પ્રમાણભૂત નમૂનાઓની શ્રેણી તૈયાર કરવામાં આવી હતી.કૉલમમાં તેના પ્રતિભાવ મૂલ્ય (પીક વિસ્તાર) સુધી ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવે છે.
ચોક્કસ શ્રેણીની અંદર, પ્રમાણભૂત નમૂનાની સાંદ્રતા અને પ્રતિભાવ મૂલ્ય વચ્ચે સારો રેખીય સંબંધ છે, એટલે કે W= f×A , અને પ્રમાણભૂત વળાંક બનાવવામાં આવે છે.

ચોક્કસ સમાન પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓ હેઠળ, માપવાના ઘટકના પ્રતિભાવ મૂલ્ય મેળવવા માટે અજાણ્યા નમૂનાને ઇન્જેક્ટ કરો.જાણીતા ગુણાંક f મુજબ, માપવાના ઘટકની સાંદ્રતા મેળવી શકાય છે.

બાહ્ય માનક પદ્ધતિના ફાયદા:સરળ કામગીરી અને ગણતરી, તે સામાન્ય રીતે વપરાતી માત્રાત્મક પદ્ધતિ છે;દરેક ઘટકને શોધી કાઢવાની અને એલ્યુટ કરવાની જરૂર નથી;પ્રમાણભૂત નમૂના જરૂરી છે;પ્રમાણભૂત નમૂના અને અજાણ્યા નમૂનાની માપનની શરતો સુસંગત હોવી જોઈએ;ઈન્જેક્શન વોલ્યુમ ચોક્કસ હોવું જોઈએ.

બાહ્ય માનક પદ્ધતિના ગેરફાયદા:પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓ ઊંચી હોવી જરૂરી છે, જેમ કે ડિટેક્ટરની સંવેદનશીલતા, પ્રવાહ દર અને મોબાઇલ તબક્કાની રચના બદલી શકાતી નથી;દરેક ઈન્જેક્શનના વોલ્યુમમાં સારી પુનરાવર્તિતતા હોવી જોઈએ.

2. આંતરિક પ્રમાણભૂત પદ્ધતિ: સચોટ, પરંતુ મુશ્કેલીકારક, પ્રમાણભૂત પદ્ધતિઓમાં સૌથી વધુ ઉપયોગમાં લેવાય છે

મિશ્ર માનક બનાવવા માટે સ્ટાન્ડર્ડમાં આંતરિક ધોરણની જાણીતી રકમ ઉમેરવામાં આવે છે, અને જાણીતી સાંદ્રતાના કાર્યકારી ધોરણોની શ્રેણી તૈયાર કરવામાં આવે છે.મિશ્ર ધોરણમાં સ્ટાન્ડર્ડ અને ઈન્ટરનલ સ્ટાન્ડર્ડનો દાઢ ગુણોત્તર યથાવત રહે છે.ક્રોમેટોગ્રાફિક કૉલમમાં ઇન્જેક્ટ કરો અને પ્રતિભાવ મૂલ્ય તરીકે (માનક નમૂના પીક વિસ્તાર/આંતરિક પ્રમાણભૂત નમૂના પીક વિસ્તાર) લો.પ્રતિભાવ મૂલ્ય અને કાર્યકારી ધોરણની સાંદ્રતા વચ્ચેના રેખીય સંબંધ અનુસાર, એટલે કે W= f×A, એક પ્રમાણભૂત વળાંક બનાવવામાં આવે છે.

અજ્ઞાત નમૂનામાં આંતરિક ધોરણની જાણીતી રકમ ઉમેરવામાં આવે છે અને માપવાના ઘટકના પ્રતિભાવ મૂલ્ય મેળવવા માટે કૉલમમાં ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવે છે.જાણીતા ગુણાંક f મુજબ, માપવાના ઘટકની સાંદ્રતા મેળવી શકાય છે.

આંતરિક માનક પદ્ધતિની લાક્ષણિકતાઓ:ઓપરેશન દરમિયાન, નમૂના અને આંતરિક ધોરણને એકસાથે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે અને ક્રોમેટોગ્રાફિક કૉલમમાં ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવે છે, તેથી જ્યાં સુધી મિશ્રિત દ્રાવણમાં આંતરિક ધોરણ સાથે માપેલા ઘટકની માત્રાનો ગુણોત્તર સ્થિર હોય ત્યાં સુધી નમૂનાના જથ્થામાં ફેરફાર માત્રાત્મક પરિણામોને અસર કરશે નહીં..આંતરિક પ્રમાણભૂત પદ્ધતિ નમૂનાના જથ્થાના પ્રભાવને સરભર કરે છે, અને તે પણ મોબાઇલ તબક્કા અને ડિટેક્ટર, તેથી તે બાહ્ય પ્રમાણભૂત પદ્ધતિ કરતાં વધુ સચોટ છે.

ભાગ
08 જથ્થાત્મક વિશ્લેષણ પરિણામોને અસર કરતા પરિબળો

નબળી ચોકસાઈ આના કારણે થઈ શકે છે:

અયોગ્ય પીક એરિયા એકીકરણ, નમૂનાની તૈયારી દરમિયાન દાખલ કરાયેલ નમૂનાનું વિઘટન અથવા અશુદ્ધિઓ, નમૂનાની શીશી સીલબંધ નથી, નમૂના અથવા દ્રાવક વોલેટિલાઇઝેશન, નમૂનાની ખોટી તૈયારી, નમૂનાના ઇન્જેક્શન સમસ્યાઓ, ખોટી આંતરિક પ્રમાણભૂત તૈયારી

નબળી ચોકસાઇ માટે સંભવિત કારણો:

અયોગ્ય પીક એકીકરણ, ઇન્જેક્શન અથવા ઇન્જેક્ટર સમસ્યાઓ, નમૂનાનું વિઘટન અથવા નમૂનાની તૈયારી દરમિયાન રજૂ કરાયેલ અશુદ્ધિઓ, ક્રોમેટોગ્રાફિક સમસ્યાઓ, ડિગ્રેડેડ ડિટેક્ટર પ્રતિસાદ